DNase I
A DNase I (Deoxyribonuclease I) hè una endodesossiribonucleasi chì pò digerirà DNA a catena singola o doppia.Ricunnosce è scinde i ligami fosfodiesteri per pruduce monodeossinucleotidi o oligodeossinucleotidi a filamentu singulu o doppiu cù gruppi di fosfati à u 5'-terminale è hydroxyl à u 3'-terminale.L'attività di DNase I dipende da Ca2+ è pò esse attivata da ioni di metalli divalenti cum'è Mn2+ è Zn2+.5 mM Ca2+ protegge l'enzima da l'idrolisi.In presenza di Mg2+, l'enzima puderia ricunnosce è scinderà in modu aleatoriu qualsiasi situ in ogni filu di DNA.In presenza di Mn2+, i filamenti doppiu di DNA ponu esse ricunnisciuti simultaneamente è cleaved in quasi u stessu situ per furmà frammenti di DNA di punta flat o frammenti di DNA di punta appiccicosa cù 1-2 nucleotidi protruding.
Pruprietà di u produttu
Bovine Pancreas DNase I hè stata espressa in u sistema di espressione di levadura è purificata.
Coponenti
| Cumpunente | Volume | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNase I, senza RNasi | 20 μL | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Trasportu è Storage
1. Stabilità di almacenamiento: - 15 ℃ ~ -25 ℃ per u almacenamentu;
2.Transport Stability: Trasportu sottu ghjacciu;
3. Furnitu in: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerol, pH 7,6 à 25 ℃.
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di enzima chì degrada completamente 1 µg di DNA pBR322 in 10 minuti à 37 ° C.
Controlu di qualità
RNase:5U di DNase I cù 1,6 μg MS2 RNA per 4 ore à 37 ℃ ùn produce alcuna degradazione cum'è determinata da l'elettroforesi di gel d'agarose.
Battèrica Endotossina:LAL-test, secondu a Farmacopea Cinese IV edizione 2020, u metudu di test limite di gel, regula generale (1143).U cuntenutu di l'endotossina bacteriana deve esse ≤10 EU/mg.
Istruzzioni per l'usu
1.Preparate a suluzione di reazione in u tubu senza RNase secondu e proporzioni elencate quì sottu:
| Cumpunente | Volume |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μl |
| DNase I, RNase free (5U/μL) | 1 U per μg di RNA |
| ddH2O | Finu à 10 μL |
2,37 ℃ per 15 minuti;
3.Add the termination buffer to stop the reaction, and heat at 65 ℃ for 10 minutes to inactivate DNase I. A mostra pò esse direttamente utilizata per u prossimu esperimentu di trascrizzione.
Notes
1.Use 1U DNase I per μg di RNA, o 1U DNase I per menu di 1μg di RNA.
2.EDTA deve esse aghjuntu à una cuncentrazione finale di 5 mM per prutege l'RNA da esse degradati durante l'inattivazione di l'enzyme.
