Rnase A
A ribonucleasi A (RNaseA) hè un polipeptide monofila chì cuntene 4 legami disulfuri cù un pesu moleculare di circa 13,7 kDa.L'RNasi A hè una endoribonucleasi chì degrada specificamente l'RNA monocatenariu à i residui C è U.In particulare, a scissione ricunnosce u legame fosfodiesteru furmatu da a 5'-ribose di un nucleotide è u gruppu fosfatatu nantu à a 3'-ribose di u nucleotide pirimidina adiacente, cusì chì i 2, 3'-fosfati ciclici sò idrolizzati à u 3 currispondente. ′fosfati nucleosidici (ad es. pG-pG-pC-pA-pG è scisso da RNasi A per generare pG-pG-pCp e A-PG).A RNase A hè a più attiva in a scissione di l'RNA monocatena.A cuncentrazione di travagliu cunsigliata hè 1-100μG/mL, cumpatibile cù diversi sistemi di reazione.A cuncentrazione di sali bassu (0-100 mM NaCl) pò esse aduprata per cutà l'RNA monofila, l'RNA a doppia fila è e catene RNA formate da l'ibridazione RNA-DNA.Tuttavia, à alta concentrazione di sali (≥ 0,3 M), RNase A scinde solu specificamente l'ARN monocatenariu.
A RNase A hè più comunmente utilizata per sguassà RNA durante a preparazione di DNA plasmidi o DNA genomicu. Ch'ella sia o micca DNase hè attivu durante u prucessu di preparazione pò facilmente affettà a reazione.U metudu tradiziunale di fogghiu in un bagnu d'acqua pò esse usatu per inattivà l'attività DNase.Stu pruduttu ùn cuntene DNase è proteasi, è ùn hà micca bisognu di trattamentu termale prima di l'usu.Inoltre, stu pruduttu pò ancu esse usatu in esperimenti di biologia moleculare cum'è l'analisi di prutezzione RNase è l'analisi di sequenza RNA.
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu pò esse guardatu à -25 ~ -15 ℃, validu per 2 anni.
Istruzzioni
Questu hè unu di i metudi cumuni per preparà a suluzione di almacenamento RNase A.Pò esse ancu preparatu daaltri metudi secondu i metudi tradiziunali in u laboratoriu o letteratura di riferimentu (cum'èsciogliendo direttamente in soluzione 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 o Tris-NaCl)
1. Aduprate 10 mM acetate di sodiu (pH 5,2) per preparà 10 mg / mL di suluzione di almacenamento RNase A.
2. Riscaldamentu à 100 ℃ per 15 min
3. Cool à a temperatura di l'ambienti, aghjunghje 1/10 volume di 1 M Tris-HCl (pH 7,4), aghjustate u so pH à 7,4 (perper esempiu, aghjunghje 500 ml di 10 g/ml di soluzione di almacenamento di RNasi 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-imballate à -20℃ per u almacenamentu congelatu, chì pò esse stabile finu à 2 anni.
[Note]: Quandu si bolle a suluzione RNaseA in cundizioni neutri, a precipitazione di RNase si forma;Boil it à un pH più bassu, è s'ellu ci hè precipitazione, pò esse osservatu, chì pò esse causatu da a presenza di impurità di prutezione.Se u sedimentu si trova dopu à ebollizione, l'impurità ponu esse eliminate da centrifugazione à alta velocità (13000 rpm), è poi sub-imballate per u almacenamentu di congelazione.
L'infurmazione di u produttu
| Sinonimi | ribonucleasi I;ribonucleasi pancreatica;ribonucleasi 3'-pirimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Apparizione | Polvere liofilizzata bianca |
| Pesu moleculare | ~ 13,7 kDa (sequenza di aminoacidi) |
| Valore Ph | 7.6 (range di attività 6-10) |
| Temperature adattate | 60 ℃ (range di attività 15-70 ℃) |
| Agente attivatore | Na2+.K+ |
| Inibitore | Inibitore di Rnasi |
| Metudu di inattivazione | Ùn pò micca inattivatu da u riscaldamentu, hè cunsigliatu di utilizà a colonna centrifuga |
| Origine | Bovini |
| Solubilità | Soluble in acqua (10 mg/ml) |
| Perdita nantu à a secca | ≤5,0% |
| Attività enzimatica | ≥60 Kunitz unità/mg |
| Puntu isoelettricu | 9.6 |
Notes
Per a vostra sicurezza è salute, per piacè purtassi camice di laboratoriu è guanti dispunibuli per u funziunamentu.
