Robustart Taq DNA Polymerase

Robustart Taq DNA Polymerase hè una DNA polimerasi hot start.Stu pruduttu ùn pò micca solu inibisce megliu a reazzione non-specifica causata da l'anneling non-specificu di i primers o l'aggregazione di primer in u prucessu di preparazione è amplificazione di u sistema PCR.Dunque, hà una specificità eccellente è hè più efficace per l'amplificazione di mudelli di cuncentrazione bassa, è hè adattatu per a reazione di amplificazione di PCR multiplexed.Inoltre, stu pruduttu hà una applicabilità assai bona, è i risultati di amplificazione stabile ponu esse ottenuti in diversi tipi di reazzioni PCR.

Cumpunenti

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimerasi

2.10 × PCR Buffer II (senza Mg²+) (opzionale)

3.25 mM MgCl₂(opcional)

* 10 × PCR Buffer II (senza Mg²+) ùn cuntene dNTP è Mg²+, aghjunghje dNTP è MgCl₂quandu preparanu u sistema di reazzione.

Applicazioni cunsigliatu

1.Amplificazione rapida.

2.Amplificazione multipla.

3.Amplificazione diretta di sangue, tamponi è altri campioni.

4.Detezzione di malatie respiratorie.

Cundizione di almacenamiento

-20 ° C per u almacenamentu à longu andà, deve esse mischju bè prima di l'usu, evitendu friquenti-discongeli.

* Se a precipitazione si trova dopu a refrigerazione, hè normale;Hè cunsigliatu di equilibrà a temperatura di l'ambienti prima di mischjà è aduprà.

Definizione di unità

Una unità attiva (U) hè definita cum'è a quantità di enzima chì incorpora 10 nmol di desoxyribonucleotide in materiale insolubile à l'acidu à 74 ° C per 30 minuti utilizendu DNA di sperma di salmone attivatu cum'è mudellu / primer.

Controlu di qualità

1.Purezza elettroforetica SDS-PAGE più grande di 98%.

2.Sensibilità di amplificazione, cuntrollu batch-to-batch, stabilità.

3.Nisuna attività di nucleasi esogena, nè contaminazione di endonucleasi esogene o esonucleasi

Istruzzioni

Configurazione di a reazione

Note:

1) a.U buffer ùn cuntene dNTP è Mg²+, aghjunghje dNTP è MgCl₂quandu preparanu u sistema di reazzione.

2) b.Se s'utilice per qPCR / qRT-PCR, e sonde fluorescenti deve esse aghjuntu à u sistema di reazione.Di solitu, una cuncentrazione di primer finali di 0,2 μM darà boni risultati;se u rendiment di reazzione hè poviru, a cuncentrazione di primer pò esse aghjustata in a gamma di 0,2-1 μM.A cuncentrazione di a sonda hè generalmente ottimizzata in u intervalu di 0,1-0,3 μM.Esperimenti di gradiente di cuncentrazione ponu esse realizati per truvà a megliu cumminazione di primer è sonda.

Protokollu di ciclu termale

Notes

1.A velocità di amplificazione di l'ADN polimerasi veloce ùn deve esse menu di 1 kb/10 s.L'aumentu è a caduta di a temperatura, u modu di cuntrollu di a temperatura è l'efficienza di cunduzzione di calore di diversi strumenti PCR varianu assai, per quessa, hè cunsigliatu di ottimisà e cundizioni di reazione ottimali per u strumentu specificu di PCR veloce.

2.U sistema hè assai adattabile, cù più specificità è sensibilità.

3.Adatta per l'usu cum'è reagenti di rilevazione PCR d'alta sensibilità, è pò esse usatu in reazzioni di amplificazione PCR multiplex.

4.5′→3′ attività polimerasi, 5′→3′ attività exonuclease;senza attività exonuclease 3′→5′;senza funzione di correzione.

5.Adatta per teste qualitative è quantitative di PCR è RT-PCR.

6.L'estremità 3' di u pruduttu PCR hè A, chì pò esse direttamente clonatu in un vettore T.

7.U metudu di trè fasi hè cunsigliatu per primers cù temperature di annealing bassu o per l'amplificazione di frammenti più longu di 200 bp.