Ultra Nuclease GMP-grade
Cat No: HC2016A
UltraNuclease GMP-grade hè spressu è purificatu in Escherichia coli (E.coli) da ingegneria genetica è preparatu in ambienti GMP.Puderà riduce a viscosità di u supernatante cellulare è u lisatu cellulare in a ricerca scientifica, aumentà l'efficienza di purificazione di e proteine è rinfurzà a ricerca funziunale di a proteina.U pruduttu pò ancu riduce i residui di l'acidu nucleicu host à pg-grade, migliurà u rendiment è a sicurezza di i prudutti biologichi di l'applicazioni cumprese a purificazione di virus, a fabricazione di vaccini, è a fabricazione farmaceutica di proteini / polisaccaridi.Inoltre, u pruduttu pò ancu esse applicatu per prevene l'agglutinazione di e cellule mononucleari di sangue perifericu umanu (PBMC) in a terapia cellulare è u sviluppu di vaccini.
UltraNuclease hè furnitu in forma di un reattivu sterilizatu, eluutu in buffer (20mM Tris-HCL pH 8.0, 2mM MgCl, 20 mM NaCl, 50% glicerina), cù l'apparenza di un liquidu trasparente incolore.Stu pruduttu hè pruduciutu da i requisiti di prucessu GMP è furnitu in una forma liquida.
Cumpunenti
UltraNuclease GMP (250 U/μL)
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu hè speditu cù ghiaccio seccu è pò esse guardatu à -25 ℃ ~ -15 ° C per dui anni.
Se u pruduttu hè apertu è hè statu guardatu à 4 ℃ per più di una settimana, ricumandemu di filtru.u pruduttu per prevene a contaminazione microbiana.
Specificazioni
| Espressione Host | E. coli recombinante cù u genu UltraNuclease |
| Pesu Molecular | 26,5 kDa |
| puntu soelectric | 6.85 |
| Purità | ≥99% (SDS-PAGE) |
| Storage Buffer | 20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50% glicerina |
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Definizione di unità | La definizione di una unità di attività (U) è la quantità di enzima utilizzatacambia u valore di assorbimentu di ΔA260 da 1.0 in 30 minuti in un 2. 625 mLsistema di reazione à 37 ℃ cù un pH di 8,0 (equivalente à a digestione completa di37 μg DNA di sperma di salmone in oligonucleotidi). |
Istruzzioni
1. Campione Cullizzioni
Cellule aderenti: sguassate u mediu, lavate e cellule cù PBS, è sguassate u supernatant.
Cellule in sospensione: raccoglie e cellule per centrifugazione, lavate e cellule con PBS, centrifugate a 6.000rpm per 10 min, cullate u pellet.
Escherichia coli: raccogliere i batteri per centrifugazione, lavare una volta con PBS, centrifugare a 8.000rpm per 5 min, è cullà u pellet.
2. Trattamentu Sample
Traite i pellets di cellule raccolti cun tampone di lisi à u rapportu di massa (g) à u voluminu (mL) 1: (10-20), o per metudi meccanichi o chimichi nantu à u ghjacciu o à a temperatura di l'ambienti (1 g di pellet cellulare cuntene circa
109 cellule).
3. Trattamentu Enzyme
Aghjunghjite 1-5mM MgCl à u sistema di reazzione è aghjustate u pH à 8-9.
Aghjunghjite UltraNuclease secondu u rapportu di 250 Unità per digerirà 1 g di pellet di cellula, incubate à 37 ℃ per più di 30 minuti.Per piacè riferite à a forma "Tempu di reazione cunsigliatu" per scegliedurata di u trattamentu.
4. Supernatant Cullizzioni
Centrifugare à 12.000 rpm per 30 minuti è raccoglie u supernatant.
Nota: Se a suluzione hè acidica o alkalina, o cuntene alta concentrazione di sali, detergenti, odenaturanti, per piacè aumentate a dosa di l'enzima o allargà u tempu di trattamentu in cunseguenza.
Cundizioni di reazione cunsigliatuons
| Parametru | Cundizione ottimali | Cundizione efficace |
| Mg² + cuncentrazione | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperature | 37 ℃ | 0-42 ℃ |
| Cuncentrazione DTT | 0-100 mM | > 0 mm |
| Cuncentrazione di mercaptoethanol | 0-100 mM | > 0 mm |
| Concentrazione di cationi monovalenti | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Concentrazione di fosfatatu | 0-10 mM | 0-100 mM |
Cunsigliatu Reazione U tempu (37 ℃, 2 mM Mg²+, pH 8,0)
| Quantità UltraNuclease (Concentrazione Finale) | Tempu di reazione |
| 0,25 U/mL | > 10 h |
| 2,5 U/mL | > 4h |
| 25 U/mL | 30 min |
Note:
Per piacè purtassi i PPE necessarii, cum'è un mantellu di laboratoriu è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità!
