Ultra Nuclease
UltraNuclease hè un ingegneria genetica dendunuclaese derivata da Serratia marcescens, chì hè capace di degradare l'ADN o l'RNA, sia a catena doppia o unica, lineare o circular in una larga gamma di cundizioni, degrada completamente l'acidi nucleici in oligonucleotidi 5'-monofosfati cù una lunghezza di 3-5 basi. .Dopu à a mudificazione di l'ingegneria genetica, u pruduttu hè fermentatu, spressu è purificatu in Escherichia coli (E. coli), chì reducestheviscosity of cell supernatant and cell lysate inscientific research, ma ancu migliurà l'efficienza di purificazione è a ricerca funziunale di a proteina.Pò esse ancu usatu in a terapia genica, a purificazione di virus, a produzzione di vaccini, l'industria farmaceutica di proteine è di polisaccaridi cum'è un reattivu di rimozione di l'acidu nucleicu di residuu d'ospite.
Caratteristiche di u produttu
| CAS No. | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Pesu Molecular | 30 kDa |
| Puntu isoelettricu | 6.85 |
| Purità di Proteina | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Attività specifica | ≥1.1×106U/mg |
| Temperature ottimali | 37 ° C |
| pH ottimale | 8.0 |
| Attività Proteasi | negativu |
| Bioburden | ＜10 CFU/100.000U |
| Proteina residuale di a cellula host | ≤ 10 ppm |
| Metallu pesante | ≤ 10 ppm |
| Endotossina bacteriana | ＜0.25EU/1000U |
| Storage Buffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2 ， 20 mM NaCl, 50% Glicerol |
Cundizioni di almacenamiento
≤0 ° C di trasportu; -25 ~ -15 ° C Stoccaggio, validità di 2 anni (evite congelazione-scongelamento).
Definizione di unità
A quantità di enzima utilizata per cambià u valore di assorbimentu di △A260 da 1,0 in 30min à 37 °C, pH 8,0, equivalente à 37μg di DNA di sperma di salmone digeritu tagliando in oligonucleotidi, hè stata definita cum'è unità attiva (U).
Controlu di qualità
Proteina residuale di a cellula host: kit ELISA
•Proteasi Residui: 250KU/mL UltraNuclease hà reagitu cù u sustrato per 60min, nisuna attività hè stata rilevata.
•Endotossina bacteriana: LAL-Test, Farmacopea di a Republica Populare Chine Volume 4 (2020 Edition) metudu di test di limite di gel.Reguli Generali (1143).
•Bioburden: Farmacopea di a Republica Populare Chine Volume 4 (Edizione 2020) - Generale
Rules for Sterility Test (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Heavy Metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operazione
L'attività UltraNuclease hè stata significativamente inibita quandu a concentrazione di SDS era più di 0.1% o EDTA
A cuncentrazione era più di 1mM. Surfactant Triton X-100, Tween 20 è Tween 80 ùn anu micca effettu nant'à nuclease
proprietà quandu a cuncentrazione era sottu à 1,5%.
| Operazione | Funzionamentu ottimali | Operazione valida |
| Temperature | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mm |
| DTT | 0-100 mm | > 100 mm |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100 mm | > 100 mm |
| Ioni di metalli monovalenti (Na+, K+ ecc.) | 0-20 mm | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mm | 0-100 mm |
Usu è Dosage
• Eliminate l'acidu nucleicu esogenu da i prudutti di vaccine, riduce u risicu di toxicità di l'acidu nucleicu residuale è migliurà a sicurità di u produttu.
• Reduce a viscosità di u liquidu di l'alimentu causatu da l'acidu nucleicu, accurtà u tempu di trasfurmazioni è aumenta u rendiment di prutezione.
• Eliminate l'acidu nucleicu chì hà imbulighjatu a particella (virus, corpu d'inclusione, etc.), chì hè favurèvule
à a liberazione è a purificazione di a particella.
| Tipu sperimentale | Pruduzzione di Proteina | Virus, vaccine | Droghe Cellule |
| Numero di cellule | 1 g di cellula di pesu umitu (resuspenditu cù 10 ml di buffer) | 1 l di fermentazione supernatant liquidu | 1 L di cultura |
| Dosage Minimu | 250 U | 100 U | 100 U |
| Dosage cunsigliatu | 2500 U | 25000 U | 5000 U |
• U trattamentu di Nuclease pò migliurà a risuluzione è a ricuperazione di a mostra per a cromatografia di colonna, l'elettroforesi è l'analisi di blotting.
• In a terapia genica, l'acidu nucleicu hè eliminatu per ottene virus purificati adeno-associati.
