BspQI
BspQI pò esse spressione recombinantly in E. coli chì ponu ricunnosce siti specifichi è sò pruduciuti sottu.
BspQI, una endonuclease di restrizione di l'endonucleasi di restrizzioni IIs, hè derivata da una ceppa di E. coli recombinante chì porta u genu BspQI clonatu è mudificatu da Bacillus sphaericus.Pò ricunnosce siti specifichi, è a sequenza di ricunniscenza è i siti di clivaggio sò i seguenti:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Funzioni di u produttu
1. Alta attività, digestioni rapida;
2. Attività di stella bassa, assicurendu un tagliu precisu cum'è "scalpel";
3. Senza BSA è senza origine animale;
Sensibilità di metilazione
Da metilazione:Ùn Sensibili;
Dcm di metilazione:Ùn Sensibili;
Metilazione CpG:Ùn Sensibili;
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu deve esse speditu ≤ 0℃;Conservate à -25 ~ - 15 ℃ cundizione.
Buffer di almacenamentu
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, ditiotreitolo 1,0 mM, Albumina ricombinante 500 µg/ml, Trition X-100 0,1% e glicerolo 50% (pH 7,0 @ 25 °C).
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di enzima necessaria per digerirà 1 µg di DNA di cuntrollu internu in 1 ora à 50 ° C in un volume di reazione tutale di 50 µL.
Controlu di qualità
Test di purezza di proteine (SDS-PAGE):A purezza di BspQI era ≥95% determinata da l'analisi SDS-PAGE.
RNase:10U di BspQI cù 1.6μg MS2 RNA per 4 ore à 50 ℃ ùn produce alcuna degradazione determinata da l'elettroforesi di gel d'agarose.
Attività DNase Non Specifica:10U di BspQI con 1 μg λ DNA a 50 ℃ per 16 ore, rispetto a 50 ℃ per 1 ora, non produce DNA in eccesso come determinato da elettroforesi su gel d'agarosio.
Legatura e tagliatura:Après digestion de 1 μg de λDNA avec 10U BspQI, les fragments d'ADN peuvent être liés à l'ADN ligase T4 à 16ºC.E sti frammenti ligati ponu esse recut cù BspQI.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-specific TaqMan qPCR detection mustrò chì E.coli genome residue ≤ 0.1pg/ul.
Residu di proteine ospiti:≤ 50 ppm
Battèrica Endotossina: LAL-test, secondu a Farmacopea Cinese IV edizione 2020, u metudu di test limite di gel, regula generale (1143).U cuntenutu di l'endotossina bacteriana deve esse ≤10 EU/mg.
Sistema di reazione è cundizioni
| Cumpunente | Volume |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μl |
| dd H2O | Finu à 50 μL |
Cundizioni di reazione: 50 ℃, 1 ~ 16 ore.
Inattivazione di u calore: 80 ° C per 20 min.
U sistema di reazione è e cundizioni cunsigliati ponu furnisce un effettu di digestione enzimatica relativamente bonu, chì hè solu per riferimentu, fate riferimentu à i risultati sperimentali per i dettagli.
Applicazione di u produttu
Restriction endonuclease digestion, Rapid cloning.
Notes
1. U voluminu di l'enzyme ≤ 1/10 di u voluminu di reazzione.
2. L'attività di a stella pò accade quandu a cuncentrazione di glicerol hè più di 5%.
3. L'attività di cleavage pò accade quandu u Substrate sottu u rapportu cunsigliatu.
