Kit ELISA CHO HCP
Un metudu ELISA immunosorbente in un passu hè utilizatu in questu test.I campioni chì cuntenenu CHOK1 HCP reagiscenu simultaneamente cù l'anticorpu anti-CHOK1 di capra marcatu HRP è l'anticorpu anti-CHOK1 rivestitu nantu à a piastra ELISA, furmendu infine un cumplessu sandwich di anticorpu marcatu cù anticorpi in fase solida-HCP.L'antigenu-anticorpu unbound pò esse eliminatu da lavà a piastra ELISA.U sustrato TMB hè aghjuntu à u pozzu per una reazione abbastanza.U sviluppu di u culore hè firmatu dopu l'aghjunghje a suluzione di stop, è u valore OD o assorbanza di a suluzione di reazione à 450/650nm hè lettu cù un lettore di microplate.U valore OD o valore di assorbanza hè proporzionale à u cuntenutu HCP in a suluzione.Da questu, a cuncentrazione di HCP in a suluzione pò esse calculata secondu a curva standard.
Applicazione
Stu kit hè adupratu per detectà quantitativamente u cuntenutu di i residui di a proteina di a cellula host CHOK1 in campioni.
Coponenti
| S/N | Cumpunente | Cuncentrazione | Cundizioni di almacenamiento |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0,5 mg/mL | ≤-20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/mL | ≤–20 ℃, prutegge da a luce |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, prutegge da a luce |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Solu suluzione | NA | RT |
| 6 | Sigillanti per micropiastre | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Piastre di prerivestimentu ad alta adsorbimentu | NA | 2-8 ℃ |
Attrezzatura necessaria
| Consumables / Equipment | Fabricazione | Catalogu |
| Lettore di micropiatti | Dispositivi Molecular | Spectra Max M5, M5e, o equivalente |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, o equivalente |
| Mixer à vortex | IKA | MS3 Digital, o equivalente |
Storage è stabilità
1.Trasportu à -25 ~ -15 ° C.
2.I cundizioni di almacenamiento sò cum'è mostra in a Table 1;i cumpunenti 1-2 sò almacenati ≤–20 ° C, 5-6 sò almacenati RT, 3、4、7、8 sò almacenati à 2-8℃;u periodu di validità hè di 12 mesi.
Parametri di u produttu
1.Sensibilità: 1 ng/mL
2.Gamma di rilevazione: 3-100 ng/mL
3.Précision : CV intra-essai ≤ 10%, CV inter-essai ≤ 15%
4.Copertura HCP: > 80%
5.Specificità: Stu kit hè universale perchè reagisce specificamente cù CHOK1 HCP indipendentemente da u prucessu di purificazione.
Preparazione di reagenti
1.PBST 0.05%
Pigliate 15 ml di 20 × PBST 0,05%, diluted in ddH2O, è hà fattu finu à 300 ml.
2.1,0% BSA
Pigliate 1g di BSA da l'buttiglia è dilute in 100 ml di PBST 0,05%, mischjà bè finu à dissolutu cumpletamente, è guardate à 2-8 ° C.U buffer di diluzione preparatu hè validu per 7 ghjorni.Hè cunsigliatu di preparà quantu necessariu.
3.Soluzione di rilevazione 2 μg/mL
Pigliate 48μL di 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP è diluite in 11,952μL di 1% BSA per ottene una concentrazione finale di suluzione di rilevazione 2μg/mL.
4.QC è Preparazione di Standard CHOK1 HCP
| Tubu Innò. | Uriginale | Cuncentrazione | Volume | 1% BSA | Volume tutale | Finale |
| A | Standard | 0,5 mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1 000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Table: Preparazione di QC è Standards
Prucedura di analisi
1.Preparate i reagenti cum'è indicatu in "Preparazione di reagenti" sopra.
2.Pigliate 50μL di standard, campioni è QC (riferite à a Tabella 3) in ogni pozzu, dopu aghjunghje 100μL di suluzione Detection (2μg/mL);Coperta a piastra cù un sigillante, è mette a piastra ELISA nantu à u termomixer.Incubate à 500 rpm, 25±3 ℃ per 2 ore.
3.Invertite u microplate in u lavu è scartate a suluzione di revestimentu.Pipette 300μL di PBST 0,05% in ogni pozzu per lavà a piastra ELISA è scartà a suluzione, è ripetite u lavatu 3 volte.Invertite a piastra nantu à una spugna di carta pulita è asciugate.
4.Aghjunghjite 100 μL di sustrato TMB (vede a Tabella 1) à ogni pozzu, sigillate a piastra ELISA, è incubate in u bughju à 25±3 ℃ per 15 min.
5.Pipettate 100 μL di soluzione stop in ogni pozzu.
6.Misura l'assorbanza à a lunghezza d'onda di 450/650 nm cù un lettore di micropiastre.
7.Analizà e dati da SoftMax o software equivalente.Trace a curva standard utilizendu un mudellu di regressione logistica di quattru parametri.
Esempiu di curva standard
NOTA: Se a cuncentrazione di HCP in u campione supera u limitu superiore di a curva standard, deve esse diluita bè cù tampone di diluzione prima di pruvà.
NOTE
A suluzione di stop hè l'acidu sulfuricu 2M, per piacè manighjà cun cura per evità spruzzi!
