Kit di Genotipatura di Mouse

Cat No: HCR2021A

Stu pruduttu hè un kit cuncepitu per l'identificazione rapida di genotipi di mouse, cumprese l'estrazione di DNA crudo è u sistema di amplificazione PCR.U pruduttu pò ièssiri usatu per amplification PCR direttamente da a coda di u surci, orechja, toe è altri tissuti dopu à clivage sèmplice da Lysis Buffer è Proteinase k.Nisuna digestione di notte, estrazione di fenol-cloroformu o purificazione di colonna, chì hè simplice è accurtà u tempu di esperimenti.U pruduttu hè adattatu per l'amplificazione di frammenti target finu à 2kb è reazioni PCR multiplex cù finu à 3 coppie di primers.U 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix cuntene DNA polymerase genetically engineered, Mg²⁺, dNTPs è un sistema di buffer ottimisatu per furnisce l'alta efficienza di amplificazione è a tolleranza di l'inhibitore, perchè e reazzioni di PCR ponu esse realizate aghjunghjendu mudelli è primers è reidratendu u pruduttu à 1 ×.U pruduttu PCR amplificatu cù stu pruduttu hà una basa "A" prominente à l'estremità 3' è pò esse usatu direttamente per a clonazione TA dopu a purificazione.

Cumpunenti

Cundizioni di almacenamiento

I prudutti deve esse guardatu à -25 ~ -15 ℃ per 2 anni.Dopu à u scongelu, Lysis Buffer pò esse almacenatu à 2 ~ 8 ℃ per un usu multiplu à breve termine, è mischjà bè quandu si usa.

Applicazione

Stu pruduttu hè adattatu per l'analisi di knockout di u mouse, a rilevazione transgénica, genotipu è cusì.

Features

1.Funzionamentu simplice: ùn hè micca bisognu di estrazione di DNA genomicu;

2.Ampia applicazione: adatta per l'amplificazione diretta di vari tessuti di mouse.

Istruzzioni

1.Liberazione di DNA genomicu

1) Preparazione di lisatu

U lisatu di tissutu hè preparatu secondu u numeru di campioni di topi da lisà (u lisatu di tissutu deve esse preparatu in situ secondu a dosa è mischiatu bè per l'usu), è a proporzione di reagenti necessarii per una sola mostra hè a seguente:

2) Preparazione Sample è Lysis

Usu di tissutu cunsigliatu

Pigliate una quantità adatta di campioni di tissuti di mouse in tubi di centrifuga puliti, aghjunghje 200μL di lisatu di tissutu frescu à ogni tubu di centrifuga, vortex è scuzzulate, poi incubate à 55 ℃ per 30 minuti, è poi riscaldate à 98 ℃ per 3 minuti.

3) Centrifugazione

Agite bè u lisatu è centrifuga à 12.000 rpm per 5 minuti.U supernatant pò esse usatu cum'è mudellu per l'amplificazione PCR.Se u mudellu hè necessariu per u almacenamentu, trasfiriu u supernatant à un altru tubu di centrifuga sterile è guardate à -20 ℃ durante 2 settimane.

2.Amplificazione PCR

Eliminate u 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix da -20 ℃ è scongelu nantu à u ghjacciu, mischjà a testa in giù è preparate u sistema di reazione PCR secondu a tabella seguente (operate nantu à u ghjacciu):

Nota:

a) A quantità aghjunta ùn deve esse più di 1/10 di u sistema, è se troppu hè aghjuntu, l'amplificazione PCR pò esse impedita.

Cundizioni PCR cunsigliate

Nota:

a) Température de recuit : en se référant à la valeur Tm de l'amorce, il est recommandé de régler la température de recuit à la valeur de Tm plus petite de l'amorce +3~5℃.

Prublemi cumuni è suluzione

1.Nisuna striscia mirata

1) Pruduttu di lisi eccessivu.Sceglite a quantità più adatta di mudellu, di solitu micca più di 1/10 di u sistema;

2) Taglia di mostra troppu grande.Dilute u lysate 10 volte è poi amplify, o riduce a dimensione di mostra è re-lysis;

3) I campioni di tissuti ùn sò micca freschi.Hè ricumandemu à utilizà campioni di tissuti freschi;

4) Poveru qualità di prima.Aduprate DNA genomicu per l'amplificazione per verificà a qualità di primer è ottimisà u disignu di primer.

2.Amplificazione non specifica

1) A temperatura di annealing hè troppu bassu è u numeru di ciclu hè troppu altu.Aumentà a temperatura di annealing è riduce u nùmeru di ciculi;

2) A cuncentrazione di u mudellu hè troppu altu.Reduce a quantità di mudellu o dilute u mudellu 10 volte dopu l'amplificazione;

3) Poveru specificità di prima.Optimizà u disignu di prima.

Notes

1.Per evità a contaminazione incruciata trà i campioni, l'arnesi di campionamentu multipli deve esse preparatu, è a superficia di l'arnesi pò esse pulita cù una soluzione di ipoclorito di sodiu 2% o un pulitore di l'acidu nucleicu dopu ogni campionamentu se l'usu ripetutu hè necessariu.

2.Hè ricumandemu d'utilizà tessuti freschi di u mouse, è u voluminu di campionamentu ùn deve esse troppu grande per evità di affettà i risultati di amplificazione.

3.Lysis Buffer deve evitari friquenti-discongeli frequenti, è pò esse almacenatu à 2 ~ 8 ℃ per un usu multiplu à breve termine.S'ellu hè almacenatu à a temperatura bassa, a precipitazione pò esse, è deve esse dissoluta prima di l'usu.

4.PCR Mix deve evitari friquenti-discongeli frequenti, è pò esse almacenatu à 4 ℃ per un usu ripetutu à breve termine.

5.Stu pruduttu hè solu per a ricerca sperimentale scientifica è ùn deve esse usatu in diagnostichi clinichi o trattamentu.