Multiplex qPCR Probe Premix
Cat No: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) hè una pre-soluzione per l'amplificazione quantitativa PCR 2 × in tempu reale carattarizata da una alta sensibilità è specificità, chì hè di culore blu, è hà l'effettu di l'aghjunzione di mostra.Stu pruduttu hè un reagente pre-mixed 2× Mix chì permette à quattru reazzioni PCR quantitative fluorescenti in un solu pozzu di reazione.Stu pruduttu cuntene u metudu di l'anticorpu geneticamente mudificatu à l'enzima Taq di partenza calda, chì migliurà assai a sensibilità è a specificità di l'amplificazione.À u listessu tempu, stu pruduttu hà ottimisatu assai u buffer multi-reazzione, chì pò migliurà l'efficienza di amplificazione di a reazione è prumove l'amplificazione efficace di mudelli di cuncentrazione bassa.Stu pruduttu pò esse usatu per genotipu è analisi quantitative multiplex.
Specificazione
| Hot Start | Partenza calda integrata |
| Metudu di rilevazione | Rilevazione di prima sonda |
| Metudu PCR | qPCR |
| Polimerasi | Taq DNA polimerasi |
| Tipu di mostra | DNA |
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu hè speditu cù ghiaccio seccu è pò esse guardatu à -25 ~ -15 ℃ per 2 anni.
Istruzzioni
1. ReazioneSistema
| Cumpunenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Mélange d'amorces (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Mélange de sondes (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Tintura di riferimentu Rox | 0,5 | 1× |
| Template DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | finu à 25 | - |
Note:Imbulighjate bè prima di l'usu per evità bolle eccessivi da una forte agitazione.
a.Concentrazione di primer: Primer Mix cuntene parechje coppie di primers, di solitu ogni primer à una cuncentrazione finale di 0,2 μmol/L è pò ancu esse aghjustatu trà 0,1 è 0,5 μmol/L secondu apprupriatu.
b.Cuncentrazione di sonda: Probe Mix cuntene parechje sonde cù diversi signali di fluorescenza, è a cuncentrazione di ogni sonda pò esse aghjustata trà 50 è 250 nmol / L secondu a situazione specifica.
1.Riferimentu di tintura Rox: Hè utilizatu nantu à l'instrumentu di amplificazione di PCR in tempu reale cum'è Applied Biosystems per correggere l'errore di u signale di fluorescenza generatu trà i pozzi;stu pruduttu ùn cuntene riferimentu di tintura Rox.Cas # 10200 hè cunsigliatu se necessariu.
2.Template dilution: qPCR hè assai sensitivu, è hè cunsigliatu di dilute u mudellu per l'usu.Se u mudellu hè una solu suluzione di cDNA, u voluminu di u mudellu ùn deve esse più di 1/10 di u voluminu tutale.
3.Sistema di reazione: 25μL, 30μL o 50 μL hè cunsigliatu per assicurà l'efficacità è a ripetibilità di l'amplificazione di u gene di destinazione.
4.Preparazione di u sistema: Per piacè preparate in u bancu super pulitu, è utilizate i cunsiglii è i tubi di reazione senza residu di nuclease;hè cunsigliatu di utilizà i punte cù cartuccia di filtru.Evite a contaminazione incruciata è a contaminazione di l'aerosol.
2.U prugramma di reazione
| Passu di ciclu | Temp. | U tempu | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 15 sec | 45 |
| Ricottura / Estensione | 60 ℃ | 30 sec |
Note:
1.Recuit/Extension : La température et le temps peuvent être réglés de manière appropriée selon la valeur Tm de l'amorce conçue.
2.Acquisizione di segnali di fluorescenza: U tempu di acquisizione di segnali di fluorescenza necessariu per i diversi strumenti di rilevazione qPCR hè diversu, per piacè stabilisce secondu u limitu di tempu minimu.U tempu di parechji strumenti cumuni hè stabilitu cusì:
20 sec: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec: Applied Biosystems 7300
32 sec: Applied Biosystems 7500
Notes
Per piacè purtassi i PPE necessarii, cum'è un mantellu di laboratoriu è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità!
