Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) hè un kit di PCR quantitativa multiplex basatu in RNA cum'è mudellu.In u prucessu di l'esperimentu, a trascrizione inversa è a PCR quantitativa sò stati realizati in u stessu tubu, chì simplificà l'operazione sperimentale è riduce u risicu di contaminazione.In questu kit, u primu filu di cDNA hè stata sintetizzata in modu efficiente da a transcriptasi inversa resistente à u calore è amplificata quantitativamente da HotStart Tag DNA Polymerase.U kit cuntene principarmenti buffer MP optimized, enzymes mix, etc A suluzione buffer digià cuntene Mg2+è dNTP.Inoltre, i fatturi chì ponu inibisce in modu efficace l'amplificazione PCR non specifica è migliurà l'efficienza di amplificazione di parechje reazzioni qPCR sò aghjuntu, chì ponu assicurà l'efficienza di amplificazione è realizà una reazione di amplificazione multipla.U sistema dUTP / UDG hè statu aghjuntu per prevene efficacemente u risicu di contaminazione di aerosol.
Cumpunenti
1. Buffer
2. Enzyme Mix
Specificazione
| Hot Start | Partenza calda integrata |
| Metudu di rilevazione | Rilevazione di prima sonda |
| Metudu PCR | Un passu RT-qPCR |
| Polimerasi | Taq DNA polimerasi |
| Tipu di mostra | DNA |
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu hè speditu cù ghiaccio seccu è pò esse guardatu à -25 ~ -15 ℃ per 1 annu.Si deve evitari frequenticongelate-scongelu.Hè cunsigliatu di salvà separatamente.
Istruzzioni
1.Reazione Sistema
| Cumpunenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Mix d'enzimi | 1 | - |
| Mélange d'amorce/sonde (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Template RNA | 1-10 | - |
| H2O senza RNasi | à 25 | - |
Note:
Assicuratevi di mischjà bè prima di l'usu, evitendu bolle eccessivi causate da vibrazioni viulenti.
a.Concentrazione di primer: miscela di primer chì include primer multiplex, secondu a situazione cuncentrazione ottima di primer forse trà 0.l è 1.0μM.
b.Cuncentrazione di a sonda: Mistura di sonda chì include un gruppu fluorescente di differenza di marcatura di sonda multiplex, secondu a situazione, a concentrazione ottima di a sonda forse trà 0,05 è 0,5μM.
c.Template dilution: qPCR hè assai sensibile è hè cunsigliatu di diluisce u template.U valore Ct di cuntrollu hè adattatu trà 20 è 35.
d.Preparazione di u sistema: Per piacè preparate in a tavola di travagliu ultra pulita, è pipettatore è tubu di reazione senza residu di nucleasi;hè cunsigliatu di utilizà a testa di pistola cù l'elementu di filtru.Evite a contaminazione incruciata è a contaminazione di l'aerosol.
2. Cycling OptimizedProtocolu
| Ciclu passu | Temp. | U tempu | Cicli |
| Trascrizione inversa | 50 ℃a | 20 minuti | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Reazione di amplificazione | 95 ℃ | 15 sec |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sec c |
Note:
a.Trascrizione inversa: A temperatura pò selezziunà 42 ° C o 50 ° C.
b.Reazione di amplificazione: A temperatura hè aghjustata secondu u valore Tm di i primers designati.
c.Acquisizione di signali di fluorescenza: Per piacè stabilisce a prucedura sperimentale secondu i requisiti di u manuale di l'instrumentu.
Notes
Per piacè purtassi i PPE necessarii, cum'è un mantellu di laboratoriu è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità.
