Inibitore di rnase (senza glicerina)
L'inibitore di RNase murina hè un inibitore di RNasi murina recombinant espresso è purificatu da E.coli.Si lega à RNase A, B o C in un rapportu 1: 1 per via di ligami non covalenti, inibendu cusì l'attività di i trè enzimi è prutegge l'RNA da a degradazione.Tuttavia, ùn hè micca efficace contr'à RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H o RNase da Aspergillus.L'inibitore di RNasi murina hè statu testatu da RT-PCR, RT-qPCR è IVT mRNA, è era compatibile cù diverse reverse transcriptases commerciali, DNA polimerasi è RNA polimerasi.
In cunfrontu cù l'inibitori di RNase umani, l'inibitori di RNase murini ùn cuntene micca duie cisteine chì sò assai sensibili à l'ossidazione chì provoca l'inattivazione di l'inibitore.Chì a rende stabile à bassu cuncentrazione di DTT (menu di 1 mM).Questa funzione a rende adattata per l'usu in reazzioni induve l'alte concentrazioni di DTT hè avversu à a reazione (per esempiu, RT-PCR in tempu reale).
Aapplicazione
Stu pruduttu pò esse largamente utilizatu in ogni esperimentu induve l'interferenza RNase hè pussibule per evità a degradazione di RNA, cum'è:
1.First-strand cDNA sintesi, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2.Protect RNA da a degradazione in trascrizione / traduzzione in vitro (per esempiu, replicazione virali in vitro);
3.Inhibition di l'attività RNase durante l'isolamentu di l'RNA è a purificazione.
Cundizioni di almacenamiento
Store à -25~-15℃;
Cicli freeze-thaw ≤ 5 volte;
Valida per 1 anni.
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di RNase Inhibitor necessaria per inibisce l'attività di 5 ng di RNase A da 50%.
Pesu moleculare
L'RNase Inhibitor (senza glicerina) hè una proteina di 50 kDa.
Controlu di qualità
Esonucleasi Attività:
L'incubazione di 40 U di enzima cù 1 μg di DNA di digestione λ-Hind III per 16 ore à 37 ° C ùn hà micca risultatu in una degradazione rilevabile di l'ADN cum'è determinatu da l'elettroforesi di gel.
Attività di l'endonucleasi:
L'incubazione di 40 U di l'enzima cù 1 μg λ DNA per 16 ore à 37 ° C hà risultatu in una degradazione rilevabile di l'ADN determinata da l'elettroforesi di gel.
Nicking Attività:
L'incubazione di 40 U di enzima cù 1 μg pBR322 per 16 ore à 37 ℃ ùn hà micca risultatu in una degradazione rilevabile di l'ADN cum'è determinatu da l'elettroforesi di gel.
RNase Attività:
L'incubazione di 40 U di enzima cù 1,6 μg MS2 RNA per 4 ore à 37 ℃ ùn hà micca risultatu in una degradazione rilevabile di l'RNA cum'è determinatu da l'elettroforesi di gel.
E.coli DNA:
40 U di Enzyme è rilevata da TaqMan qPCR.U DNA di E.coli hè ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1.Don't scuzzulate o agitate viulente per impediscenu l'inattivazione di l'enzyme.
2.RNase inhibitor hè attivu à temperature chì varieghja da 25 ℃ à 55 ℃ è hè inactivated à ≥65 ℃.
3.L'attività di RNase H, RNase 1, è RNase T1 ùn hè micca impeditu.
4.U intervallu di pH per inibisce l'attività di RNase hè largu (attivu à pH 5-9), chì mostra l'attività massima à pH 7-8.
