Un passu veloce RT-qPCR Probe Premix-UNG
Cat No: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) hè un kit di rilevazione rapida RT-qPCR basata in sonda adattatu per a PCR quantitativa single-plex o multiplex utilizendu RNA cum'è mudellu (cum'è virus RNA).Stu pruduttu usa una nova generazione di Taq DNA Polymerase modificata da anticorpi è una transcriptase inversa dedicata in un passu, cù un buffer ottimizzatu per amplificazione rapida, chì hà una velocità di amplificazione più veloce, una efficienza di amplificazione più alta è specificità.Supporta l'amplificazione equilibrata sia in single-plex sia in multiplex di campioni di cuncentrazione bassa è alta in pocu tempu.
Cumpunenti
1. 5×RT-qPCR buffer (U+)
2. Mix d'enzimi (U+)
Note:
a.5×RT-qPCR buffer (U+) include dNTP e Mg2+;
b.A mistura enzimatica (U+) include trascrittasi inversa, Hot Start Taq DNA polimerasi, inibitore di RNasi è UDG;
c.Aduprate punte RNase-Free, tubi EP, etc.
Prima di l'usu, mischjà bè u buffer 5×RT-qPCR (U+).Se ci hè una precipitazione dopu a scongelu, aspittà chì u buffer torna à a temperatura di l'ambienti, mischjà è dissolve, è poi l'utilizanu normalmente.
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu hè speditu cù ghiaccio seccu è pò esse guardatu à -25 ~ -15 ℃ per 1 annu.
Istruzzioni
1. Reazione Sistema
| Cumpunenti | Volume (20 μL reazione) |
| 2 × RT-qPCR buffer | 4 μL |
| Mélange d'enzymes (U+) | 0,8 μL |
| Prima avanti | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Sonda TaqMan | 0,05 ~ 0,25μM |
| Template | X μL |
| Acqua senza RNase | finu à 25 μL |
Note: u voluminu di reazione hè 10-50μL.
2. Protokollu di a bicicletta (Sstandard)
| Ciclu passu | Temp. | U tempu | Cicli |
| Trascrizione inversa | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 10 sec | 45 |
| Ricottura / Estensione | 60 ℃ | 30 sec |
| Protocolu di ciclismu (rapidu) Ciclu passu |
Temp. |
U tempu |
Cicli |
| Trascrizione inversa | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Ricottura / Estensione | 60 ℃ | 10 s |
Note:
a.A temperatura di trascrizzione inversa hè trà 50 ℃ à 60 ℃, l'aumentu di a temperatura aiuta à amplificà e strutture cumplesse è mudelli d'altu cuntenutu CG;
b.A temperatura d'annealing ottimali deve esse aghjustata nantu à u valore Tm di l'amori, è selezziunate u tempu più brevi per a raccolta di signali di fluorescenza basatu nantu à l'instrumentu PCR in Tempu Reale.
Notes
Per piacè purtassi i PPE necessarii, cum'è un mantellu di laboratoriu è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità!
