One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat No: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix hè per a quantificazione di fluorescenza basatu nantu à a tintura SYBR Green I.Aduprendu primers specifichi di geni, a trascrizione inversa è e reazioni qPCR sò cumplette in un tubu, eliminendu a necessità di operazioni ripetute di apertura di tappi è pipetting, migliurà assai l'efficienza di l'analisi è riducendu u risicu di contaminazione.Per i campioni di RNA, u kit impiega a trascrittasi inversa resistente à u calore per una sintesi efficiente di cDNA è HotStart Taq DNA Polymerase per l'amplificazione quantitativa.Sutta u sistema di buffer ottimisatu, a sensibilità di u kit pò esse alta cum'è 0.1 pg per miri altamente espressi è finu à 1 pg per miri moderatamente espressi.U kit hè adattatu per l'amplificazione è a quantificazione di campioni di DNA.Permette a rilevazione sensitiva è a quantificazione di l'acidi nucleici da diversi campioni vegetali è animali, cellule è microorganismi.
Cumpunenti
| No | Nome | Volume | Volume |
| 1 | Buffer avanzatu | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Mix d'enzimi avanzati | 20 μl | 200 μl |
| 3 | RNase Free H2O | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
Cundizioni di almacenamiento
Stu pruduttu deve esse guardatu à -25 ~ -15 ℃ luntanu da a luce per 1 annu.
Istruzzioni
cunfigurazione di u sistema 1.Reactiond
| Cumpunenti | Volume (μL) | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| Buffer avanzatu | 12.5 | 25 | 1× |
| Mix d'enzimi avanzati | 1 | 2 | - |
| Primer primariu (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Amorce inverse (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Tamplate RNAb | X | X | - |
| RNase Free H2Oc | à 25 | à 50 | - |
Note:
1) a.TLa concentration finale de l'amorce était de 0,2 μmol/L, qui pourrait également être réglée entre 0,1 et 1 μmol/L selon le cas.
2) b.U reattivu hè estremamente sensibile, cù RNA Totale in a gamma di 1pg-1μg, è a prova di campioni umani hà dimustratu un input ottimale di 1 pg-100 ng, cuntrullendu per un valore Ct generale in a gamma di 15-30 cum'è adattatu.
3) c.Hè cunsigliatu di utilizà 20μL o 50μL per assicurà a validità è a riproducibilità di l'amplificazione di u gene di destinazione.
4) d.Per piacè preparate in u bancu ultra-pulitu è utilizate punte è tubi di reazione senza residui di nucleasi;cunsiglii cù cartucce di filtru sò cunsigliatu.Evite a contaminazione incruciata è a contaminazione di l'aerosol.
2.U prugramma di reazione
| Passu di ciclu | Temp. | U tempu | Cicli |
| Trascrizione inversa | 50 ℃a | 6 minuti | 1 |
| Denaturazione iniziale | 95 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Reazione di amplificazione | 95 ℃ | 15 sec | 40 |
| 60 ℃b | 30 sec | ||
| Fase di curva di fusione | Defaults di l'instrumentu | 1 | |
Note:
1) a.A temperatura di trascrizione inversa pò esse selezziunata trà 50-55 ° C secondu i bisogni sperimentali.Per i campioni di DNA, u prucessu di trascrizione inversa pò esse omessi.
2) b.In casi speciali, a temperatura di ricottura / allargamentu pò esse regulata secondu u valore di prima Tm, 60 °C hè cunsigliatu.
Notes
1. Stu pruduttu hè solu per usu di ricerca.
2. Per piacè operate cù mantellu di labburatoriu è guanti dispunibuli, per a vostra sicurità.
