RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Stu pruduttu cuntene buffer di reazione, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polimerasi è transcriptase inversa resistente à u calore), Protettori liofilizzati è cumpunenti di coloranti cromogeni.Per utilizà, basta aduprà Buffer, l'enzima di reazione è u primer sò mischiati è aghjunghjenu à u mudellu;agghiuncennu liophilized protectant pò esse dritta.Hè stata cunnessa à un liofilizatu è liofilizatu, è solu i primi è i mudelli sò stati aghjuntu quandu anu utilizatu.Stu kit furnisce una deteczione visuale rapida è chjara di l'amplificazione, chì a reazione negativa hè indicata in rossu è a reazione positiva hè indicata da un cambiamentu à u giallu.
Cumpunente
| Cumpunente | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Buffer di amplificazione mediata da loop (cù colorante) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Protettore liofilizatu | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Applicazioni
Per l'amplificazione isotermica di DNA o RNA.
Cundizioni di almacenamiento
Trasportatu cù ghiaccio seccu, almacenatu à -25 ~ -15 ℃.Evite friquenti-discongeli, u pruduttu hè validu per 12 mesi.
Protocolu
1.Scongete u buffer di reazione per esse usatu à a temperatura di l'ambienti.Vortex brevemente o invertite i tubi parechje volte per mischjà bè, poi centrifuge per cullà u liquidu à u fondu di u tubu.
2.Preparazione di u sistema di reazzione.Stu reagente pò esse preparatu in dui sistemi di reazione, mischju di reazione liquidu è mischju di sistema liofilizatu.
1) Preparate un mischju di reazzione liquidu
| Cumpunente | Volume |
| Buffer di amplificazione mediata da loop (cù colorante) | 10 μl |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μl |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Modelli DNA/RNA b | × μL |
| Acqua senza nucleasi | Finu à 50 μL |
2) Mix di sistema di liofilizazione
① Preparate una mistura liofilizzata
| Cumpunente | Volume |
| Buffer di amplificazione mediata da loop (cù colorante) | 10 μl |
| Protettore liofilizatu | 20 μl |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μl |
| Acqua senza nucleasi | Finu à 50 μL |
② Liofilizzazione: U Mix preparatu hè statu liofilizatu in un sistema 50μL
③ Preparate a mistura di reazione
| Cumpunente | Volume |
| Miscela liofilizzata | 1 pezzu |
| 10 × Primer Mixa | 5 μl |
| Modelli DNA/RNA b | × μL |
| Acqua senza nucleasi | Finu à 50 μL |
Note:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (soluble in acqua) hè cunsigliatu per l'acidu nucleicu templ.
1.Incubate à 65 ° C per 30-45 minuti, chì pò esse allungatu in modu adattatu secondu u cambiamentu di culore Tempu di reazione.
2.Sicondu l'occhiu nudu, u giallu era pusitivu è u rossu era negativu.
Notes
1.U sali pò appare in u fondu di u tubu buffer, vortex brevemente o invertite tubi parechje volte per mischjà bè à a temperatura di l'ambienti.
2.A temperatura di reazione pò esse ottimisata trà 62 ℃ è 68 ℃ secondu a cundizione di i primers.
3.I reagenti imballati ùn devenu esse esposti à l'aria per un bellu pezzu.
4.A reazione di decolorazione rossa è gialla dipende da u cambiamentu di pH di u sistema di reazzione, per piacè ùn aduprate micca a suluzione di almacenamentu di l'acidu nucleicu Tris chì cuntene, cunsigliatu per aduprà ddH.2O l'acidu nucleicu almacenatu;
5.L'esperimentu deve esse standardizatu, cumprese a preparazione di u sistema di reazzione, a liofilizazione, u prucessu di mostra è l'aghjunzione di mostra;
6.Per evitari a contaminazione, hè cunsigliatu per preparà u sistema di reazzione in un bancu ultra-pulitu, in altri Add templates to the fume hood of the room per evitari falsi interferenze pusitivi.
