Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG hè un reagente specializatu cuncepitu per e reazioni qualitative è quantitative di PCR in Tempu Reale utilizendu a rilevazione basata in sonda, sviluppata apposta per i prucessi di liofilizazione.Contene un novu enzima hot-start Hotstart Taq plus (DG), chì hà a so attività enzimatica Taq sigillata à a temperatura di l'ambienti, inibendu in modu efficace l'amplificazione non specifica causata da l'annealing non specificu di primer o a furmazione di dimer di primer in cundizioni di bassa temperatura, migliurà cusì. a specificità di a reazione di amplificazione.Stu reagentu usa un buffer specificu qPCR ottimizzatu è un sistema anti-contaminazione UNG/dUTP per ottene un rapidu start-hot, migliurendu assai l'efficienza è a sensibilità di e reazioni qPCR.Pò ottene curve standard boni in una larga gamma di aree di quantificazione è eseguisce accuratamente a quantificazione, prevenendu in modu efficace l'amplificazione falsa positiva causata da i prudutti di PCR residuali o a contaminazione di aerosol.Stu reagente hè cumpatibile cù a maiò parte di strumenti PCR quantitativi fluorescenti da i pruduttori cum'è Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad è Roche, ecc., è mostra una bona stabilità in forma liofilizzata.
A cumpusizioni di reagenti
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratuitu) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (opcional)
Cundizioni di almacenamiento
Conservazione à longu andà à -20 ℃;pò esse guardatu à 4 ℃ finu à 3 mesi.Imbulighjate bè prima di l'usu èevite u congelamentu è u scongelu ripetutu.
Protocolu di ciclismu
| Prucedura | Temp. | U tempu | Ciclu |
| Digestioni | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Attivazione di polimerasi | 95 ℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| Ricottura è estensione | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyStem Preparazione
|
Cumpusizioni |
Volume di 25 µL |
Volume di 50 µL |
Concentrazione finale |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+gratuitu) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mm |
| 4 × lioprotettore1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Template DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | À 25 µL | À 50 µL | —— |
1. A cuncentrazione finale di 0.2μM per i primi generalmente dà boni risultati;Quandu u rendiment di a reazione hè poviru, aghjustate a cuncentrazione di primer in a gamma di 0,2-1μM cum'è necessariu.A cuncentrazione di a sonda hè tipicamente ottimizzata in a gamma di 0.1-0.3μM attraversu esperimenti di gradiente per truvà combinazioni ottimali.
2. U numaru di copia di geni di destinazione cuntenuti in diversi tipi di mudelli varieghja;se ne necessariu, a diluzione di gradiente pò esse realizata per determinà a quantità ottima di l'addizione di u mudellu.
3. Stu sistema pò esse liofilizatu;Quandu i clienti usanu stu sistema senza esigenze di liofilazione, 4 × lioprotettori ponu esse aghjuntu selettivamente; se ci sò prudutti liofilizzati richiesti, durante a fase di validazione di u rendiment di u produttu di reagenti liquidi, deve aghjunghje 4 × lioprotettori per assicurà a coerenza cù i cumpunenti di u sistema liofilizatu. è effetti.
Quandu u sistema hè adupratud per a liofilizzazione, preparanu u sistema as seguenti:
| Cumpusizioni | 25µL Sistema di reazione |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratuitu) (DG) | 5 µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4 × lioprotettore | 6,25 µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1 µL |
| ddH2O | À 18 ~ 20 µL |
* Se altri sistemi per a liofilizzazione sò necessarii, cunsultate separatamente.
Prucessu di liofilizazioness
| Prucedura | Temp. | U tempu | Cundizione | Pressione |
| Pre-congelazione | 4 ℃ | 30 min | Mantene |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Cooling | ||
| -50 ℃ | 180 min | Mantene | ||
| Asciugatura primaria | -30 ℃ | 60 min | Riscaldamentu |
Vacuum Ultimate |
| -30 ℃ | 70 min | Mantene | ||
| Asciugatura secundaria | 25 ℃ | 60 min | Riscaldamentu |
Vacuum Ultimate |
| 25 ℃ | 300 min | Mantene |
2. U prucessu di liofilizazione sopra hè solu per riferimentu.Diversi tippi di prudutti è diversi liofilizzatori anu paràmetri diffirenti, cusì l'aghjustamenti ponu esse fatti sicondu l'attualecundizioni durante l'usu.
3. Diversi prucessi di lyophilization pò esse adattatu per diverse dimensioni batch di lyophilizedi prudutti, per quessa, una validazione di prova sufficiente deve esse realizata quandu si usa per a produzzione à grande scala.
Istruzzioni per l'usu di liofilizatud pulveri
1. Centrifuga brevemente u polu liofilizatu;
2. Aghjunghjite u mudellu di l'acidu nucleicu à u polu liofilizatu è aghjunghje l'acqua finu à 25µL;
3. Imbulighjate bè da centrifugazione è eseguite nantu à a macchina.
Controlu di qualità:
1. Testi funziunali: sensibilità, specificità, riproducibilità di qPCR.
2. Nisuna attività di nucleasi esogenu, nè contaminazione esogena di endo / exonuclease.
Informazioni tecniche:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG usa una nova enzima hot-start chì permette un rapidu hot-start in 1 ~ 5 minuti;Per via di una formulazione di tampone speciale, hè adattatu per reazioni PCR quantitative fluorescenti multiplex.
2. Ha una specificità più alta chì migliora significativamente a sensibilità di a rilevazione di limiti PCR quantitativi di fluorescenza, facendu a normalizazione di e curve di amplificazione, u valore di fluorescenza ottene una migliione evidente à mudelli di cuncentrazione bassa, adattati cum'è reagenti di rilevazione PCR quantitativi di fluorescenza di alta sensibilità.
3. Per i primi cù una temperatura di annealing più bassa o più di frammenti di 200bp, u metudu 3-step hè cunsigliatu.
4. L'efficienza di l'utilizazione di dUTP è a sensibilità à l'enzyme UNG sò diffirenti per diversi geni di destinazione, cusì se l'usu di u sistema UNG porta à una diminuzione di a sensibilità di deteczione, u sistema di reazzione deve esse aghjustatu è ottimisatu.Se u supportu tecnicu hè necessariu cuntattate a nostra cumpagnia.
5. Aduprate spazii dedicati è pipette prima è dopu l'amplificazione, portate guanti durante l'operazione è rimpiazzà spessu;Ùn apre u tubu di reazzione dopu a finitura di a PCR per minimizzà a contaminazione di i campioni da i prudutti PCR.
