Premix universale SYBR GREEN qPCR (blu)

Cat No: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) hè una pre-soluzione per l'amplificazione quantitativa PCR 2 × in tempu reale carattarizata da una alta sensibilità è specificità, hè di culore blu, è hà l'effettu di traccia di l'aggiunta di mostra.U cumpunente core Taq DNA polimerasi usa l'anticorpu hot start per inibisce efficacemente l'amplificazione non specifica per via di l'annealing di primer durante a preparazione di mostra.À u listessu tempu, a formula aghjusta i fatturi di promozione per migliurà l'efficienza di amplificazione di a reazione PCR è equalizà l'amplificazione di geni cù diversi cuntenuti GC (30 ~ 70%), cusì chì a PCR quantitativa pò ottene una bona relazione lineale in una larga quantità. regione.Stu pruduttu cuntene un colorante speciale ROX Passive Reference, chì hè applicabile à a maiò parte di i strumenti qPCR.Ùn hè micca necessariu aghjustà a cuncentrazione di ROX nantu à diversi strumenti.Hè solu necessariu aghjunghje primers è mudelli per preparà u sistema di reazzione per l'amplificazione.

Cumpunenti

Universal Blue qPCR Master Mix

Cundizioni di almacenamiento

U pruduttu hè speditu cù pacchetti di ghiaccio è pò esse guardatu à -25 ℃ ~ -15 ℃ per 18 mesi.Hè necessariu per evità una forte irradiazione di luce quandu si guarda o preparanu u sistema di reazzione.

Specificazione

Istruzzioni

1.Reaction System

[Nota]: Imbulighjate bè prima di l'usu per evità bolle eccessivi da una forte agitazione.

a) Concentrazione di primer: A cuncentrazione finale di primer hè 0,2 μmol/L, è pò ancu esse aghjustatu trà 0,1 è 1,0 μmol/L, secondu u casu.

b) Cuncentrazione di u Template: Se u mudellu hè una solu suluzione di cDNA senza diluzione, u voluminu utilizatu ùn deve esse più di 1/10 di u voluminu tutale di a reazione qPCR.

c) Template dilution: Hè cunsigliatu di diluisce a suluzione di cDNA stock da 5-10 volte.A quantità ottima di mudellu aghjuntu hè megliu quandu u valore Ct ottenutu da l'amplificazione hè 20-30 cicli.

d) Sistema di reazione: Hè cunsigliatu di utilizà 20μL o 50μL per assicurà l'efficacità è a ripetibilità di l'amplificazione di u gene di destinazione.

e) Preparazione di u sistema: Per piacè preparate in u bancu super pulitu è ​​​​utilizate i punte è i tubi di reazione senza residu di nucleasi;hè cunsigliatu di utilizà i punte cù cartuccia di filtru.Evite a contaminazione incruciata è a contaminazione di l'aerosol.

2.U prugramma di reazione

Programma Standard

Prugramma rapidu

[Nota]: U prugramma veloce hè adattatu per a maiò parte di i geni, è i prugrammi standard ponu esse pruvati per i geni di struttura secundaria cumplessa individuale.

a) Température et temps de recuit : Ajustez-vous en fonction de la longueur de l'amorce et du gène cible.

b) Acquisizione di signali di fluorescenza (★): Per piacè stabilisce a prucedura sperimentale secondu i requisiti in l'istruzzioni per l'usu di l'instrumentu.

c) Curva di fusione: U prugramma predeterminatu di l'instrumentu pò esse adupratu nurmale.

3. Analisi di u risultatu 

Un minimu di trè replicati biologichi eranu necessarii per esperimenti quantitativi.Dopu a reazione, a curva di amplificazione è a curva di fusione deve esse cunfirmata.

3.1 Curva di amplificazione:

A curva di amplificazione standard hè a forma di S.L'analisi quantitativa hè più precisa quandu u valore Ct casca trà 20 è 30. Se u valore Ct hè menu di 10, hè necessariu di dilute u mudellu è eseguisce a prova di novu.Quandu u valore Ct hè trà 30-35, hè necessariu di aumentà a cuncentrazione di u mudellu o u voluminu di u sistema di reazzione, per migliurà l'efficienza di amplificazione è assicurà a precisione di l'analisi di u risultatu.Quandu u valore Ct hè più grande di 35, i risultati di a prova ùn ponu micca analizà quantitativamente l'espressione di u genu, ma pò esse usatu per l'analisi qualitativa.

3.2 Curva di fusione:

U piccu unicu di a curva di fusione indica chì a specificità di a reazione hè bona è l'analisi quantitativa pò esse realizatu;se a curva di fusione mostra picchi doppiu o multiplici, l'analisi quantitativa ùn pò esse realizatu.A curva di fusione mostra picchi doppiu, è hè necessariu ghjudicà se u piccu non-target hè dimeru di primer o amplificazione non specifica per elettroforesi di gel d'agarose di DNA.S'ellu hè un dimeru di primer, hè cunsigliatu per riduce a cuncentrazione di primer o redesign primers cun alta efficienza di amplificazione.S'ellu hè amplificazione non-specifica, per piacè aumentà a temperatura di l'anneling, o ridisegnu i primers cun specificità.

Notes

Per piacè portà u PPE necessariu, cum'è giacca di laboratori è guanti, per assicurà a vostra salute è sicurità!

Stu pruduttu hè solu per l'usu di ricerca!