Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (senza glicerina)
Bst DNA polimerasi V2 hè derivata da Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, chì hà attività di DNA polimerasi 5′→3′ è una forte attività di sostituzione di a catena, ma senza attività di esonucleasi 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 hè idealmente adattatu per strand-splacement, amplificazione isotermica LAMP (Loop mediated isothermal amplification) è sequencing rapidu.Bst DNA polimerasi V2 hè una versione hot-start basata nantu à Bst DNA polimerasi V2 (HC5005A) ottenuta da a tecnulugia di mudificazione reversibile, chì pò inibisce l'attività di DNA polimerasi à a temperatura di l'ambienti, cusì u sistema di reazione pò esse operatu è formulatu à a temperatura di l'ambienti per impediscenu micca. -amplification specifichi è migliurà efficienza reazzione, è sta versione pò esse lyophilized.Inoltre, a so attività hè liberata à alta temperatura, per quessa, ùn ci hè micca bisognu di un passu di attivazione separatu.
Cumpunenti
| Cumpunente | HC 5006A-01 | HC 5006A-02 | HC 5006A-03 |
Bst DNA polimerasi V2 (senza glycerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Applicazioni
1.Amplificazione isotermica LAMP
2.Reazione di spostamentu di un filu di DNA
3.Sequenza di geni GC altu
4.Sequenza di DNA di livellu di nanogramma.
Cundizione di almacenamiento
U trasportu sottu 0 ° C è esse guardatu à -25 ° C ~ -15 ° C.
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di enzima chì incorpora 25 nmol di dNTP in materiale insoluble à l'acidu in 30 minuti à 65 ° C.
Controlu di qualità
1.Test di purezza di proteine (SDS-PAGE):A purezza di Bst DNA polimerasi V2 hè ≥99% determinata da l'analisi SDS-PAGE utilizendu a rilevazione di Coomassie Blue.
2.EndonucleasiAttività:L'incubazione di una reazione da 50 μL contenente un minimu di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 cù 1 μg λDNA per 16 ore à 37 ℃ ùn si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinatu.
3.Attività Exonuclease:L'incubazione di una reazione da 50 μL contenente un minimu di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 cù 1 μg λ -Hind Ⅲ di digerisce DNA per 16 ore à 37 ℃ ùn si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinatu.
4.Attività di Nickase:L'incubazione di una reazione di 50 μL contenente un minimu di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 cù 1 μg di DNA pBR322 per 16 ore à 37 ° C ùn si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinatu.
5.Attività RNase:L'incubazione di una reazione da 50 μL contenente un minimu di 8 U di Bst DNA polimerasi V2 cù 1,6 μg di MS2 RNA per 16 ore à 37 ° C ùn si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinata.
6.E. coliDNA:120 U di Bst DNA polimerasi V2 hè screened per a presenza di E. coli genomic DNA utilizendu TaqMan qPCR cù primers specifichi per u locus rRNA E. coli 16S.A contaminazione di l'ADN genomicu di E. coli hè ≤1 Copia.
LAMP Reazione
| Cumpunenti | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (10 mM ognunu) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 μL |
| Primer mixb | 6 μl |
| Bst DNA Polymerase V2 (senza glicerolo) (8 U/uL) | 1 μl |
| Template | × μL |
| ddH₂O | Finu à 25 μL |
Note:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Sicondu i bisogni sperimentali, altri tinti ponu esse aduprati cum'è sustituti;
2) b.Primer mix : obtenu en mélangeant 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB et autres volumes.
Reazione è cundizione
1 × HC Bst V2 Buffer, a temperatura di incubazione hè trà 60 ° C è 65 ° C.
Inattivazione di u calore
80 °C, 20 minuti
