2×HiF Taq plus Master Mix
Cat No: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) hè una soluzione 2×premiscelata pronta per l'usu chì cuntene Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs, è buffer ottimizzatu.Dui anticorpi monoclonali à a temperatura di l'ambienti chì inibiscenu l'attività di polimerasi è l'attività di 3'→5'esonucleasi sò aghjuntu à u mischju maestru per una PCR Hot Start facilmente è altamente specifica.U fattore di estensione hè aghjuntu à u mischju maestru per dà à l'enzima una capacità di amplificazione di frammenti longu, a durata di l'amplificazione pò esse finu à 13 kb, l'enzima hà una attività di DNA polimerasi 5′→3′ è una 3′→5′. L'attività di esonucleasi, a so fideltà hè 83 volte quella di a DNA polimerasi Taq, chì hè 9 volte quella di a DNA polimerasi ordinaria.Hè adattatu per l'amplificazione di mudelli cumplessi, u pruduttu di l'amplificazione hè una fini smussata.
2×HIF Taq plus Master Mix (With Dye) hà i vantaghji di veloce è faciule, alta sensibilità, forte specificità, bona stabilità, etc., u sistema di reazione solu deve aghjunghje primers è mudelli, è pò esse amplificatu da dui protokollu di passu, simplificà i passi sperimentali è risparmià tempu.Stu pruduttu cuntene coloranti indicatori di l'elettroforesi, è i prudutti PCR ponu esse aduprati direttamente per l'elettroforesi.Inoltre, u pruduttu cuntene ancu un agentu protettivu specificu, perchè u mischju maestru pò mantene l'attività stabile dopu a congelazione-discongelu ripetuta.
Cundizioni di almacenamiento
I prudutti deve esse guardatu à -25 ~ -15 ℃ per 1 annu.
Specificazioni
Specificazione di u produttu | Master Mix |
Cuncentrazione | 2× |
Hot Start | Custruitu in Hot Start |
Overhang | Blunt |
A velocità di reazione | Rapidu |
Taglia (Prodottu Finale) | Finu à 13 kb |
Cundizioni per u trasportu | Ghiacciu seccu |
Tipu di pruduttu | Premix PCR d'alta fideltà |
Istruzzioni
1.Sistema di Reazione PCR
Cumpunenti | Volume (μL) |
U mudellu di DNA | Adatta |
Primer primariu (10 μmol/L) | 2.5 |
Amorce inverse (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | à 50 |
2.Utilizazione cunsigliata di diversi mudelli
Tipu di mudellu | Amplificate i frammenti da 1 kb à 10 kb |
DNA genomicu | 50 ng-200 ng |
DNA plasmidi o virale | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2,5 µL (ùn supera u 10% di u voluminu di reazione PCR finale) |
3.Protocolu di amplificazione
1) Protocolu in dui passi (mudellu di cumplessità)
Passu di ciclu | Temp. | U tempu | Cicli |
Denaturazione iniziale | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denaturazione | 98 ℃ | 10 sec | 30-35 |
Estensione | 68 ℃ | 30 sec/kb | |
L'estensione finale | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Protocolu in trè tappe (protokollu regulare)
Passu di ciclu | Temp. | U tempu | Cicli |
Denaturazione iniziale | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denaturazione | 98 ℃ | 10 sec | 30-35 |
Ricottura | 60 ℃ | 20 sec | |
Estensione | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
L'estensione finale | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Protokollu di Gradiente di Annealing (mudellu di cumplessità)
Passu di ciclu | Temperature | U tempu | Cicli |
Denaturazione iniziale | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denaturazione | 98 ℃ | 10 sec | 15 (1 ℃ riduzzione per ciclu) |
Annealing gradiente | 70-55 ℃ | 20 sec | |
Estensione | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
Denaturazione | 98 ℃ | 10 sec |
20 |
Ricottura | 55 ℃ | 20 sec | |
Estensione | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
L'estensione finale | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Funzioni sottu differente protocolu di amplificazione
Prutoccul | Dui Passi | Trè tappe | Annealing gradiente |
Spec. | prestu | mediu | lentu |
Specificità | altu | mediu | altu |
Rendimentu di a PCR | mediu | altu | mediu |
Tasso di rilevazione | altu | mediu | altu |
Notes
Per piacè purtassi i PPE necessarii, tali giacche è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità!