ADN polimerasi Wild Taq
Taq DNA Polymerase è una DNA polimerasi termostabile di Thermus aquaticus YT-1, che possiede un'attività polimerasi 5′→3′ e un'attività endonucleasi flap 5′.
Cumpunenti
| Cumpunente | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNA polimerasi (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Cundizione di almacenamiento
U trasportu sottu 0 ° C è esse guardatu à -25 ° C ~ -15 ° C.
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di enzima chì incorpora 15 nmol di dNTP in materiale insolubile à l'acidu in 30 minuti à 75 ° C.
Controlu di qualità
1.Test di purezza di proteine (SDS-PAGE):A purezza di Taq DNA polimerasi era ≥95% determinata da l'analisi SDS-PAGE.
2.EndAttività di onucleasi:Un minimu di 5 U di Taq DNA polimerasi cù 1 μg λDNA per 16 ore à 37 ℃ ùn si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinatu.
3.Attività Exonuclease:Un minimo di 5 U di Taq DNA polimerasi con 1 μg λ -Hind Ⅲ digerisce DNA per 16 ore a 37 ℃ non si traduce in alcuna degradazione rilevabile come determinato.
4.Attività di Nickase:Un minimu di 5 U di Taq DNA polimerasi cù 1 μg di DNA pBR322 per 16 ore à 37 ° C si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinatu.
5.Attività RNase:Un minimu di 5 U di Taq DNA polimerasi cù 1,6 μg MS2 RNA per 16 ore à 37 ° C ùn si traduce in alcuna degradazione rilevabile cum'è determinatu.
6.E. coliDNA:5 U di Taq DNA polimerasi hè screened per a presenza di E. coli genomic DNA utilizendu TaqMan qPCR cù primers specifichi per u locus rRNA E. coli 16S.A contaminazione di l'ADN genomicu di E. coli hè ≤1 Copia.
7.Amplificazione PCR (5,0 kb Lambda DNA)- Una reazione da 50 µL contenente 5 ng di DNA Lambda con 5 unità di Taq DNA Polymerase per 25 cicli di amplificazione PCR produce il prodotto atteso da 5,0 kb.
Configurazione di a reazione
| Cumpunenti | Volume |
| Template DNAa | facultativu |
| 10 μM Forward Primer | 1 μl |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μl |
| dNTP Mix (10 mM ognunu) | 1 μl |
| 10 × Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA polimerasib | 0,25 μL |
| Acqua senza nucleasi | Finu à 50 μL |
Note:
1) A concentrazione di reazione ottimali di mudelli diffirenti hè diversu.A tabella seguente mostra l'usu di u mudellu cunsigliatu di u sistema di reazione da 50 µL.
| DNA | A quantità |
| Genomica | 1 ng-1 μg |
| Plasmidi o virali | 1 pg-1 ng |
2) A concentrazione ottima di Taq DNA Polymerase pò varià da 0,25 µL ~ 1 µL in applicazioni specializate.
Reazioneprugramma
| Passu | Temperature(°C) | U tempu | Cicli |
| Denaturazione inizialea | 95 ℃ | 5 minuti | - |
| Denaturazione | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cicli |
| Ricotturab | 60 ℃ | 15 s | |
| Estensione | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Extension finale | 72 ℃ | 5 minuti | - |
Note:
1) A cundizione iniziale di denaturazione hè adattata per a maiò parte di e reazzioni di amplificazione è pò esse mudificata secondu a cumplessità di a struttura di u mudellu.Se a struttura di u mudellu hè cumplessu, u tempu di pre-denaturazione pò esse allargatu à 5 - 10mins per migliurà l'effettu di denaturazione iniziale.
2) La température de recuit doit être réglée en fonction de la valeur Tm de l'amorce, qui est généralement fixée à 3~5 ℃ inférieure à la valeur Tm de l'amorce;Per mudelli cumplessi, hè necessariu aghjustà a temperatura di annealing è allargà u tempu di estensione per ottene una amplificazione efficiente.
