Enzymes UDG/UNG
UDG (uracil DNA glycosylase) pò catalizà l'idrolisi di u ligame N-glicosidic trà a basa di uracile è a spina di zuccheru-fosfatu in ssDNA è dsDNA.Pò facilmente cuntrullà a contaminazione di l'aerosol è hè adattatu per i sistemi di biologia moleculare cumuni cum'è PCR, qPCR, RT-qPCR è LAMP.
Specificazioni
| Espressione Host | Recombinant E. coli with uracil DNA glycosylase gene |
| Pesu Molecular | 24. 8kDa |
| Purità | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inattivazione di u calore | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Definizione di unità | Una unità (U) hè definita cum'è a quantità di enzima necessaria per catalizà l'idrolisi di dsDNA contenente 1 μg dU in 30 minuti à 25 ℃. |
Storage
U pruduttu deve esse guardatu à -25 ℃ ~ -15 ° C per dui anni.
Istruzzioni
1.Preparazione di a mistura di reazzione PCR secondu u sistema seguente
| Cumpunenti | Volume (μL) | Concentrazione finale |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Leach |
| Template DNA | X | - |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA polimerasi (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracile DNA Glicosilasi (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Finu à 50 | - |
Nota: Sicondu i requisiti sperimentali, a cuncentrazione finale di dUTP pò esse aghjustata trà 0,2-0,6 mmol / L, è 0,2 mmol / L dTTP pò esse aghjuntu selettivamente.
2.Prucedura di amplificazione
| Passu di ciclu | Temperature | U tempu | Cicli |
| degradazione di u mudellu chì cuntene dU | 25 ℃ | 10 minuti | 1 |
| Attivazione UDG, denaturazione iniziale di u mudellu | 95 ℃ | 5 ~ 10 minuti | 1 |
| Denaturazione | 95 ℃ | 10 sec |
30-35 |
| Ricottura | 60 ℃ | 20 sec | |
| Estensione | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| L'estensione finale | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Nota: U tempu di reazione à 25 ° C pò esse aghjustatu in 5-10 minuti secondu i requisiti sperimentali.
Notes
1.UDG hè attivu in a maiò parte di i buffer di reazione PCR.
2.L'enzimi deve esse guardatu in un icebox o in un bagnu di ghiaccio quandu s'utilice, è deve esse guardatu à -20 ° C immediatamente dopu l'usu.
3.Per piacè purtassi i PPE necessarii, cum'è un mantellu di laboratoriu è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità!
