DNase I (senza rnasi) (5u/ul)
Cat No: HC4007A
A DNase I (Deoxyribonuclease I) hè una endodesossiribonucleasi chì pò digerirà DNA a catena singola o doppia.Ricunnosce è scinde i ligami fosfodiesteri per pruduce monodeossinucleotidi o oligodeossinucleotidi a filamentu singola o doppia cù gruppi di fosfati à u 5'-terminale è l'idrossile à u 3'-terminale.L'attività di DNase I dipende da Ca2+è pò esse attivatu da ioni di metalli divalenti cum'è Mn2+è Zn2+.5 mM Ca2+prutege l'enzima da l'idrolisi.In presenza di Mg2+, l'enzyme puderia ricunnosce è scinde ogni situ in ogni filu di DNA.In presenza di Mn2+, i filamenti doppiu di l'ADN ponu esse ricunnisciuti simultaneamente è cleaved in quasi u stessu situ per furmà frammenti d'ADN flat end o fragments d'ADN sticky end with 1-2 nucleotides protruding.
Cumpunenti
| Nome | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, senza RNasi | 20 μL | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Cundizioni di almacenamiento
-25 ℃ ~ -15 ℃ per u almacenamentu;Trasportu sottu pacchetti di ghiaccio.
Istruzzioni
1. Preparate a suluzione di reazione in u tubu RNase-free secondu e proporzioni elencate quì sottu:
| Cumpunente | Volume |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase free (5U/μL) | 1 U per µg di RNA① |
| ddH2O | Finu à 10 μL |
Nota: ①Calculate u voluminu di DNase I chì deve esse aghjuntu nantu à a quantità di RNA.
2. 37 ℃ per 15 minuti;
3. Aghjunghjite 0.5M EDTA à a cuncentrazione finale di 2.5mM ~ 5mM, è calore à 65 ℃ per 10 minuti per piantà a reazione.A mostra pò esse usata direttamente per a prossima reazione cum'è a trascrizione inversaesperimentu.
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di enzima chì degrada completamente 1µg di pBR322DNA in 10 minuti à 37 ℃.
Controlu di qualità
RNase:5U di DNase I con 1,6 µg di MS2 RNA per 4 ore a 37℃ non produce degradazione comedeterminata da l'elettroforesi in gel d'agarose.
Notes
1. Per piacè preparate 0.5MEDTA da sè stessu.
2. Aduprate 1U DNase I per µg di RNA.Tuttavia, se l'RNA hè menu di 1µg, per piacè aduprà 1U DNase I.
3. Per piacè mette l'enzima nantu à u ghjacciu durante l'operazione.
