Inibitore di Rnasi
L'inibitore di RNase murina hè un inibitore di RNasi murina recombinant espresso è purificatu da E.coli.Si lega à RNase A, B o C in un rapportu 1: 1 per via di ligami non covalenti, inibendu cusì l'attività di i trè enzimi è prutegge l'RNA da a degradazione.Tuttavia, ùn hè micca efficace contr'à RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H o RNase da Aspergillus.L'inibitore di RNasi murina hè statu testatu da RT-PCR, RT-qPCR è IVT mRNA, è era compatibile cù diverse reverse transcriptases commerciali, DNA polimerasi è RNA polimerasi.
In cunfrontu cù l'inibitori di RNase umani, l'inibitori di RNase murini ùn cuntene micca duie cisteine chì sò assai sensibili à l'ossidazione chì provoca l'inattivazione di l'inibitore.Chì a rende stabile à bassu cuncentrazione di DTT (menu di 1 mM).Questa funzione a rende adattata per l'usu in reazzioni induve l'alte concentrazioni di DTT hè avversu à a reazione (per esempiu, RT-PCR in tempu reale).
Aapplicazione
Stu pruduttu pò esse largamente utilizatu in ogni esperimentu induve l'interferenza RNase hè pussibule per evità a degradazione di RNA, cum'è:
1.Sintesi di u primu filu di cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Prutege l'RNA da a degradazione durante a trascrizione / traduzzione in vitro (per esempiu, sistema di replicazione virali in vitro).
3.Inibizione di l'attività RNase durante a separazione è a purificazione di l'RNA.
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu pò esse guardatu à -25~- 15 ℃, validu per 2 anni.
Buffer di almacenamentu
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT è 50% glicerol.
Definizione di unità
A quantità di inibitore di RNasi murini necessariu per inibisce l'attività di 5ng di ribonucleasi A da 50% hè stata definita cum'è una unità (U).
U pesu moleculare di a proteina
U pesu molekulari di l'inibitore di RNase murina hè 50 kDa.
Controlu di qualità
Esonucleasi Attività:
40 U di inibitore di RNasi murine con 1 μg λ -Hind III digeriscono DNA a 37 ℃ per 16 ore non producono degradazione come determinato da elettroforesi su gel d'agarosio.
Attività di l'endonucleasi:
40 U di inibitore di RNasi murine con 1 μ g λ DNA a 37 ℃ per 16 ore non producono degradazione come determinato da elettroforesi su gel d'agarosio.
Nicking Attività:
40U di inibitore di RNasi murina cù 1μ g pBR322 à 37 ℃ per 16 ore ùn produce alcuna degradazione cum'è determinata da elettroforesi in gel d'agarose.
RNase Attività:
40U di inibitore di RNasi murina con 1,6 μ g di RNA MS2 per 4 ore a 37 ℃ non produce alcuna degradazione come determinato da elettroforesi su gel di agarosio.
E.coli DNA:
40 U di l'inhibitore di RNase murine hè screened per a presenza di E. coli genomic DNA utilizendu TaqMan qPCR cù primers specifichi per u locus rRNA E. coli 16S.A contaminazione di DNA genomicu di E. coli hè ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1.Violent oscillation o stirring vi purtari a inactivation enzyme.
2.U intervallu di temperatura ottima di questu l'inhibitore era 25-55 ℃, è era inattivatu à 65 ℃ è sopra.
3.L'attività di RNase H, RNase 1 è RNase T1 ùn anu micca inhibitu da l'inhibitore murine RNase.
4.L'inhibizione di l'attività RNase hè stata truvata in una larga gamma di pH (pH 5-9 eranu tutti attivi), è l'attività più alta hè stata osservata à pH 7-8.
5.Since ribonucleases tipicamenti mantene l'attività in cundizioni di denaturazione, a cura deve esse pigliata per evitari di denaturing RNase Inhibitor molécules chì anu cumplessu cù una ribonuclease.Per prevene a liberazione di ribonucleasi attiva, si deve esse evitata temperature più di 50 ° C è cuncintrazioni elevate di urea o altri agenti denaturanti.
