Rnase A
A ribonucleasi A (RNaseA) hè un polipeptide monofila chì cuntene 4 legami disulfuri cù un pesu moleculare di circa 13,7 kDa.L'RNasi A è una endoribonucleasi che degrada specificamente l'RNA monocatenario nei residui C e U.In particulare, a scissione ricunnosce u legame fosfodiesteru furmatu da a 5'-ribosa di un nucleotide è u gruppu fosfatatu nantu à a 3'-ribosa di u nucleotide pirimidina adiacente, cusì chì i fosfati 2,3'-ciclici sò idrolizzati à u 3 currispondente. 'nucleosidi fosfati (per esempio, pG-pG-pC-pA-pG è scisso da RNasi A per generare pG-pG-pCp e A-PG).A RNase A hè a più attiva in a scissione di l'RNA monocatena.A cuncentrazione di travagliu cunsigliata hè 1-100 μ G/mL, cumpatibile cù diversi sistemi di reazione.A cuncentrazione di sali bassu (0-100 mM NaCl) pò esse aduprata per cutà l'RNA monofila, l'RNA a doppia fila è e catene RNA formate da l'ibridazione RNA-DNA.
Tuttavia, à alta concentrazione di sali (≥ 0,3 M), a RNase A scinde solu specificamente l'ARN monocatenariu.
A RNase A hè più comunmente utilizata per sguassà l'RNA durante a preparazione di DNA plasmidi o DNA genomicu.Ch'ella sia o micca DNase hè attivu durante u prucessu di preparazione pò facilmente influenzà a reazione.U metudu tradiziunale di fogghiu in un bagnu d'acqua pò esse usatu per inattivà l'attività DNase.Stu pruduttu ùn cuntene DNase è proteasi, è ùn hà micca bisognu di trattamentu termale prima di l'usu.Inoltre, stu pruduttu pò ancu esse usatu in esperimenti di biologia moleculare cum'è l'analisi di prutezzione di RNase è l'analisi di sequenza RNA.
Cundizioni di almacenamiento
U pruduttu deve esse guardatu à -25 ℃ ~ - 15 ℃ per 2 anni.
Specificazioni
| Apparizione | Polvere |
| Quantità | 100 mg / 1 g |
| Tipu di pruduttu | RNase A |
Istruzzioni
Questu hè unu di i metudi cumuni per preparà a suluzione di almacenamento RNase A.Pò esse ancu preparatuper altri metudi secondu i metudi tradiziunali in u laboratoriu o letteratura di riferimentu (cum'èsciogliendo direttamente in soluzione 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 o Tris-NaCl)
1. Aduprate 10 mM acetate di sodiu (pH 5,2) per preparà 10 mg / mL di suluzione di almacenamiento RNase A.
2. Riscaldamentu à 100 ℃ per 15 min.
3. Cool à a temperatura di l'ambienti, aghjunghje 1/10 volume di 1 M Tris-HCl (pH 7,4), aghjustate u so pH à 7,4 (perper esempiu, aghjunghje 500 mL di 10 mg/mL di soluzione di conservazione di RNasi 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Sub-imballate à -20 ℃ per u almacenamentu congelatu, chì pò esse stabile finu à 2 anni.
[Note]:
Quandu si bolle a suluzione RNaseA in cundizioni neutri, a precipitazione di RNase si forma;Boil it à un pH più bassu, è s'ellu ci hè precipitazione, pò esse osservatu, chì pò esse causatu da a presenza di impurità di prutezione.Se u sedimentu si trova dopu à ebollizione, l'impurità ponu esse eliminate da a centrifugazione à alta velocità (13000rpm), è poi sub-imballate per u almacenamentu di congelazione.
Notes
Per piacè purtassi u PPE necessariu, cum'è un mantellu di laboratoriu è guanti, per assicurà a vostra salute è a vostra sicurità.
