Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Modificazione di l'anticorpu) hè una DNA polimerasi termostabile di partenza calda da Thermus aquaticus YT-1, chì pussede un'attività polimerasi 5′→3′ è un'attività endonucleasi flap 5′.A Taq DNA polimerasi hot-start hè una Taq DNA polimerasi mudificata da anticorpi Taq termolabili.A mudificazione di l'anticorpu hà aumentatu a specificità, a sensibilità è u rendiment di PCR.
Cumpunenti
| Cumpunente | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq Buffer | 4 × 1 ml | 4 × 10 ml | 4 × 50 ml | 5 × 400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (anticorpo modificato) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 ml |
Applicazioni
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 à 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 è 50% Glycerol.
Cundizione di almacenamiento
U trasportu sottu 0 ° C è esse guardatu à -25 ° C ~ -15 ° C.
Definizione di unità
Una unità hè definita cum'è a quantità di enzima chì incorpora 15 nmol di dNTP in materiale insolubile à l'acidu in 30 minuti à 75 ° C.
Controlu di qualità
1.EndAttività di onucleasi:L'incubazione di 20 U di enzima cù 4 μg di DNA pUC19 per 4 ore à 37 ℃ hà risultatu in una degradazione rilevabile di l'ADN cum'è determinatu da l'elettroforesi di gel.
2.5 kb Lambda PCR:25 cicli di amplificazione PCR di 5 ng di DNA Lambda con 1,25 unità di Taq DNA Polymerase in presenza di 200 µM dNTP e 0,2 µM di primer si ottengono il prodotto atteso da 5 kb.
3.Attività Exonuclease:L'incubazione di una reazione da 50 µl contenente un minimu di 12,5 U di Taq DNA Polymerase cù 10 nmol di oligonucleotide 5'-FAM per 30 minuti a 37 ℃ non produce degradazione rilevabile.
4.Attività RNase:L'incubazione di 10 µL di reazione chì cuntene 20 U di enzima cù 1 µg di trascrizioni di RNA per 2 ore à 37 ° C ùn hà micca risultatu in una degradazione rilevabile di l'RNA cum'è determinatu da l'elettroforesi di gel.
5.Inattivazione di u calore:Innò.
Sistema di reazione
| Cumpunenti | Volume |
| Template DNAa | facultativu |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP Mix (10 mM ognunu) | 0,5 μL |
| 5 × HC Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA polimerasib(5U/μL) | 0,125 μL |
| Acqua senza nucleasi | Finu à 25 μL |
Note:
1) a.
| DNA | A quantità |
| Genomica | 1 ng-1 μg |
| Plasmidi o virali | 1 pg-1 ng |
2) b.A cuncentrazione ottima di Taq DNA Polymerase pò varià da 5-50 unità/mL (0,1-0,5 unità/reazione 25 µL) in applicazioni specializate.
Protokollu di ciclu termale
PCR
| Passu | Temperature(°C) | U tempu | Cicli |
| Denaturazione inizialea | 95 ℃ | 1-3 minuti | - |
| Denaturazione | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cicli |
| Ricotturab | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Estensione | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Extension finale | 68 ℃ | 5 minuti | - |
Note:
1) Una denaturazione iniziale di 1 min a 95 °C è sufficiente per la maggior parte delle amplificazioni.Per i mudelli difficili, una denaturazione più longa di 2-3 minuti à 95 ° C hè cunsigliatu.Con PCR in colonia, si consiglia una denaturazione iniziale di 5 minuti a 95 °C.
2) U passu di annealing hè tipicamente 15-60 s.La température de recuit est basée sur la Tm du couple d'amorces et est généralement de 45-68 ℃.
